Be Myself

今天早上到植物所

趙老師快10點來

他帶我去找林清平

請他教我一些PCR的東西

剛開始他問我一些東西

我發現我概念都很模糊

是真的太久沒看書了嗎

DNA複製...引子...聚合酶...

都有一些印象 但是說不出個所以然

早上他就帶我看看各種需要用到的儀器

有離心機 震盪機 殺菌箱 -82度冰箱

還有一些器材的使用方法

大概都在一樓和四樓工作

後來他給我時間自己查資料

看到底什麼是PCR

我也做了筆記 PCR：聚合酵素鍊鎖反應

洋洋灑灑寫了半張

也開始查DNA複製詳細過程

不過網站上找不到什麼好資料

於是等中午吃飯時間

我到附近吃65元便當

那家真是便宜又大碗

順便回家去拿高中生物課本

發現三下最後的課程就是這些

但是因為已經申請上所以這部分我都沒什麼念

所以1點帶了課本來K

兩點多清平帶我去操作電泳

等了20分鐘 原本染色的DNA都往正極跑了

接下來拿去染色 等了3分鐘

用手套拿到平台上照相 那平台開著紫外光

所以操作要小心 人體不能暴露在UV太久

他拍了兩張 一張說給我XD

就跟課本上那完議長一模一樣

他拿刀把他要的DNA切下來

其他的果凍就丟了

那果凍20度會凝固 65度融化

於是丟在65度的熱水中等他融化

同時從-82度冰箱中拿出大腸桿菌放在冰塊中（要讓他慢慢降溫）

等5分鐘以後加入Ligase還有plasmid

讓他成為完整的載體---Ligation

接著要把載體放入大腸桿菌E. coli---Transformation

最後放入培養基中等待明天培養出的菌落結果

把大腸桿菌跟剛做好的plasmid放在冰塊中

然後放進42度水中30秒

讓載體趁細胞膜溫度劇烈變化膨脹進入細胞中

再放回冰塊中

加入250ul SOC medium 是要讓此時脆弱的桿菌長好細胞壁

然後放在37度箱中搖晃15分鐘

接著在無菌工作環境把大腸桿菌抽出來

藉由玻璃珠5.6顆 均勻塗在培養皿中

切記無菌環境中工具不要碰撞到

TIP要懸空不要碰到別的東西

開過的東西都要過火 手上不要戴手錶等物品

我操作PUC19放入培養皿 還蠻順的

最後將三個培養皿放入37度箱中培養

等明天我的PUC19理論上會有藍色菌落

而B5 B3 的理論上我們要的是白色菌落

期待明天的學習

下班啦