今天早上到植物所

趙老師快10點來

他帶我去找林清平

請他教我一些PCR的東西

剛開始他問我一些東西

我發現我概念都很模糊

是真的太久沒看書了嗎

DNA複製...引子...聚合酶...

都有一些印象 但是說不出個所以然

早上他就帶我看看各種需要用到的儀器

有離心機 震盪機 殺菌箱 -82度冰箱

還有一些器材的使用方法

大概都在一樓和四樓工作

後來他給我時間自己查資料

看到底什麼是PCR

我也做了筆記 PCR:聚合酵素鍊鎖反應

洋洋灑灑寫了半張

也開始查DNA複製詳細過程

不過網站上找不到什麼好資料

於是等中午吃飯時間

我到附近吃65元便當

那家真是便宜又大碗

順便回家去拿高中生物課本

發現三下最後的課程就是這些

但是因為已經申請上所以這部分我都沒什麼念

所以1點帶了課本來K

兩點多清平帶我去操作電泳

等了20分鐘 原本染色的DNA都往正極跑了

接下來拿去染色 等了3分鐘

用手套拿到平台上照相 那平台開著紫外光

所以操作要小心 人體不能暴露在UV太久

他拍了兩張 一張說給我XD

就跟課本上那完議長一模一樣

他拿刀把他要的DNA切下來

其他的果凍就丟了

那果凍20度會凝固 65度融化

於是丟在65度的熱水中等他融化

同時從-82度冰箱中拿出大腸桿菌放在冰塊中(要讓他慢慢降溫)

等5分鐘以後加入Ligase還有plasmid

讓他成為完整的載體---Ligation

接著要把載體放入大腸桿菌E. coli---Transformation

最後放入培養基中等待明天培養出的菌落結果

把大腸桿菌跟剛做好的plasmid放在冰塊中

然後放進42度水中30秒

讓載體趁細胞膜溫度劇烈變化膨脹進入細胞中

再放回冰塊中

加入250ul SOC medium 是要讓此時脆弱的桿菌長好細胞壁

然後放在37度箱中搖晃15分鐘

接著在無菌工作環境把大腸桿菌抽出來

藉由玻璃珠5.6顆 均勻塗在培養皿中

切記無菌環境中工具不要碰撞到

TIP要懸空不要碰到別的東西

開過的東西都要過火 手上不要戴手錶等物品

我操作PUC19放入培養皿 還蠻順的

最後將三個培養皿放入37度箱中培養

等明天我的PUC19理論上會有藍色菌落

而B5 B3 的理論上我們要的是白色菌落

期待明天的學習

下班啦


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